ⅠNasid ukleikipengenalan
Asid nukleik dibahagikan kepada asid deoksiribonukleik (DNA) dan asid ribonukleik (RNA), antaranya RNA dibahagikan kepada RNA ribosom (rRNA), RNA messenger (mRNA) dan pemindahan RNA (tRNA) mengikut fungsinya yang berbeza.DNA terutamanya tertumpu dalam nukleus, mitokondria dan kloroform, manakala RNA diedarkan terutamanya dalam sitoplasma.Sebagai asas bahan ekspresi gen, pengekstrakan asid nukleik memainkan peranan yang sangat penting dalam penyelidikan biologi molekul dan diagnosis molekul klinikal.Kepekatan dan ketulenan pengekstrakan asid nukleik akan secara langsung mempengaruhi PCR, penjujukan, pembinaan vektor, pencernaan enzim dan eksperimen lain yang berikutnya.
Ⅱ Kaedah pengekstrakan dan penulenan asid nukleik
① Kaedah pengekstrakan fenol/kloroform
Pengekstrakan fenol/kloroform ialah kaedah klasik untuk pengekstrakan DNA, yang terutamanya menggunakan dua pelarut organik berbeza untuk merawat sampel, melarutkan asid nukleik berasaskan DNA dalam fasa air, lipid dalam fasa organik, dan protein antara dua fasa.Kaedah ini mempunyai kelebihan kos rendah, ketulenan tinggi dan kesan yang baik.Kelemahannya adalah operasi yang rumit dan masa yang lama.
② Kaedah Trizol
Kaedah Trizol adalah kaedah klasik untuk pengekstrakan RNA.Kaedah Trizol dibahagikan kepada fasa akueus dan fasa organik selepas sentrifugasi dengan kloroform, di mana RNA dibubarkan dalam fasa akueus, fasa akueus dipindahkan ke tiub EP baru, pemendakan diperoleh selepas menambah isopropanol, dan kemudian penulenan etanol.Kaedah ini sesuai untuk pengekstrakan RNA daripada tisu haiwan, sel dan bakteria.
③ Kaedah penulenan lajur emparan
Kaedah penulenan lajur emparan boleh menjerap DNA secara khusus melalui bahan penjerapan matriks silikon khas, manakala RNA dan protein boleh lulus dengan lancar, dan kemudian menggunakan garam tinggi PH rendah untuk menggabungkan asid nukleik, garam rendah elusi nilai PH tinggi untuk memisahkan dan membersihkan asid nukleik.Kelebihannya ialah kepekatan penulenan yang tinggi, kestabilan yang tinggi, tidak memerlukan pelarut organik, dan kos yang rendah.Kelemahannya ialah ia perlu disentrifugasi langkah demi langkah, lebih banyak langkah operasi.
④ Kaedah manik magnetik
Kaedah manik magnet adalah untuk membelah sampel tisu sel melalui lisat, melepaskan asid nukleik dalam sampel, dan kemudian molekul asid nukleik secara khusus diserap pada permukaan manik magnet, manakala kekotoran seperti protein dan gula dibiarkan dalam cecair itu.Melalui langkah-langkah pemisahan tisu sel, pengikatan manik magnet dengan asid nukleik, pencucian asid nukleik, elusi asid nukleik, dan lain-lain, asid nukleik tulen akhirnya diperolehi.Kelebihannya adalah operasi mudah dan penggunaan masa yang singkat, tanpa memerlukan sentrifugasi langkah.Ia mempunyai keperluan teknikal yang rendah dan boleh merealisasikan operasi automatik dan besar-besaran.Gabungan khusus manik magnetik dan asid nukleik menjadikan asid nukleik yang diekstrak dengan kepekatan dan ketulenan yang tinggi.Kelemahannya ialah harga pasaran semasa agak mahal.
⑤ Kaedah lain
Sebagai tambahan kepada empat kaedah di atas, terdapat keretakan mendidih, kaedah garam pekat, kaedah detergen anionik, kaedah ultrasonik dan kaedah enzimatik, dsb.
Ⅲ Jenis pengekstrakan asid nukleik
Foregene mempunyai platform PCR Langsung yang terkemuka di dunia, platform Pengasingan RNA dua lajur (DNA sahaja + RNA sahaja ).Produk utama termasuk kit pengasingan DNA/RNA, PCR dan siri reagen makmal molekul PCR Langsung.
① Jumlah pengekstrakan RNA
Jumlah sampel pengekstrakan RNA termasuk darah, sel, tisu haiwan, tumbuhan, virus, dll. Ketulenan tinggi dan kepekatan tinggi jumlah RNA boleh diperolehi melalui pengekstrakan jumlah RNA, yang boleh digunakan dalam RT-PCR, analisis cip, terjemahan in vitro, pengklonan molekul, Dot Blot dan eksperimen lain.
Foregene berkaitanKit Pengasingan RNA
Kit Pengasingan RNA Jumlah Haiwan--Mengekstrak RNA total ketulenan tinggi dan berkualiti tinggi dengan pantas dan cekap daripada pelbagai tisu haiwan.
Kit Pengasingan RNA Jumlah Sel--Jumlah RNA yang sangat disucikan dan berkualiti tinggi boleh diperoleh daripada pelbagai sel kultur dalam masa 11 minit.
Kit Pengasingan RNA Jumlah Tumbuhan--Ekstrak dengan cepat jumlah RNA berkualiti tinggi daripada sampel tumbuhan dengan kandungan polisakarida dan polifenol yang rendah.
Kit Pengasingan RNA Viral--Asingkan dan bersihkan RNA virus dengan cepat daripada sampel seperti plasma, serum, cecair badan bebas sel dan supernatan kultur sel.
② Pengekstrakan DNA genomik
Sampel pengekstrakan DNA genom termasuk tanah, najis, darah, sel, tisu haiwan, tumbuhan, virus, dll. Pengekstrakan DNA genom boleh digunakan dalam pencernaan enzim, pembinaan perpustakaan DNA, PCR, penyediaan antibodi, analisis hibridisasi Western blot, cip gen, tinggi -urutan throughput dan eksperimen lain.
Foregene berkaitanKit Pengasingan DNA
Kit Pengasingan DNA Tisu Haiwan--Pengekstrakan pantas dan penulenan DNA genom daripada pelbagai sumber, seperti tisu haiwan, sel, dsb.
Kit Midi DNA Darah (1-5ml)--Membersihkan DNA genomik berkualiti tinggi dengan cepat daripada darah antikoagulasi (1-5ml).
Kit Pengasingan DNA Buccal Swab/Kad FTA--Tulenkan DNA genomik berkualiti tinggi dengan cepat daripada sampel buccal swab/FTA Card.
Kit Pengasingan DNA Tumbuhan--Tulen dengan cepat dan dapatkan DNA genomik berkualiti tinggi daripada sampel tumbuhan (termasuk polisakarida dan sampel tumbuhan polifenol)
③ Pengekstrakan plasmid
Plasmid ialah sejenis DNA molekul kecil bulat dalam sel, yang merupakan pembawa biasa untuk penggabungan semula DNA.Kaedah pengekstrakan plasmid adalah untuk mengeluarkan RNA, memisahkan plasmid daripada DNA genomik bakteria, dan mengeluarkan protein dan kekotoran lain untuk mendapatkan plasmid yang agak tulen.
Kit Mini Plasmid Am--Membersihkan DNA plasmid berkualiti tinggi dengan cepat daripada bakteria yang diubah untuk eksperimen biologi molekul rutin seperti transformasi dan pencernaan enzim
④ Jenis pengekstrakan lain, pengekstrakan miRNA, dsb.
Kit Pengasingan miRNA haiwan--Mengekstrak serpihan RNA kecil 20-200nt miRNA, siRNA, snRNA dengan cepat dan cekap daripada pelbagai tisu dan sel haiwan
Ⅳ Keperluan untuk pengekstrakan asid nukleik dan hasil penulenans
① Untuk memastikan integriti struktur utama asid nukleik.
② Mengurangkan gangguan protein, gula, lipid dan makromolekul lain
③ Tidak boleh ada pelarut organik atau kepekatan tinggi ion logam yang boleh menghalang enzim dalam sampel asid nukleik.
④ RNA dan pencemaran asid nukleik lain harus dihapuskan semasa mengekstrak DNA, dan sebaliknya.
Masa siaran: Nov-24-2022
